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信帆生物帶您了解詳細(xì)的:總RNA提取試劑盒的操作步驟以及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2018-03-21      瀏覽次數(shù):1159

信帆生物帶您了解詳細(xì)的:總RNA提取試劑盒的操作步驟以及注意事項(xiàng)!現(xiàn)貨供應(yīng),咨詢!

總RNA提取試劑盒操作步驟:

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1. 樣品處理: a. 植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。

b. 動(dòng)物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。

c. 貼壁細(xì)胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞,每106細(xì)胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。

d. 細(xì)胞懸液:離心收集細(xì)胞。每106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液混勻。

e. 血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細(xì)胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘,10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細(xì)胞,可加入2倍體積紅細(xì)胞裂解液重復(fù)裂解步驟。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。

2. 將處理后的樣品在室溫放置5分鐘,使得核酸蛋白復(fù)合物*分離。

3. 向勻漿樣品中加0.2ml氯f(wàn)ang,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘。

4. 2-8℃ 12000 rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無(wú)色的水相中,把水相轉(zhuǎn)移到新管中,不要吸到沉淀。

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5. 吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8℃ 12,000 rpm離心2min,棄廢液。

6. 第4步收集的上清中加入200ul無(wú)水乙醇混勻,加入吸附柱靜置2分鐘,2-8℃ 12000rpm離心2min,棄廢液。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),2-8℃ 12,000 rpm離心2min,棄廢液。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃ 12,000 rpm離心2min,棄廢液。

9. 12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。

10. 將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA。

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注意事項(xiàng)

1,所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,操作過(guò)程要小心,帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。

2,RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測(cè)。

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