全功能免疫印跡（WB）實驗代測

全功能免疫印跡（WB）簡介：

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。

全功能免疫印跡（WB） 原理：

通過SDS-PAGE凝膠將細胞或生物樣品內(nèi)的蛋白按照蛋白分子量從大到小規(guī)律分離開。經(jīng)過PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜).上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)(目前主要用HRP標(biāo)記的第二抗體) , 經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分(目前主要使用魯米諾和二抗中的HRP 反應(yīng)發(fā)出熒光,通過儀器或者膠片顯色)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。

全功能免疫印跡實驗說明：

1、客戶需提供新鮮冰凍組織/細胞/血漿/外泌體/其他體液及一抗)

2、每張膜（1-8個樣品，一個抗體）

全功能免疫印跡（WB）實驗操作流程：

1、細胞及組織蛋白質(zhì)抽提；

2、蛋白質(zhì)定量；

3、變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)；

4、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜；

5、膜的封閉；

6、一抗、二抗孵育；

7、結(jié)果檢測：化學(xué)發(fā)光法檢測，X 膠片曝光顯影；

8、數(shù)據(jù)分析；

全功能免疫印跡（WB）實驗代測